化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)分析
化學(xué)發(fā)光免疫分析是化學(xué)發(fā)光與免疫分析相結(jié)合的方法,以化學(xué)發(fā)光劑、催化發(fā)光酶等物質(zhì)標(biāo)記抗原或抗體,當(dāng)被標(biāo)記的抗原或抗體與相應(yīng)抗體、抗原相結(jié)合后,發(fā)光底物受發(fā)光劑、催化酶等物質(zhì)作用,發(fā)生氧化還原反應(yīng)。反應(yīng)中釋放出的可見光由配套設(shè)備進(jìn)行采集與處理,獲取測(cè)定物濃度,從而達(dá)到測(cè)定目的。
近年來,化學(xué)發(fā)光免疫分析以其靈敏度高、線性動(dòng)力學(xué)范圍寬、光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、分析方法簡(jiǎn)便快速、結(jié)果穩(wěn)定、誤差小、安全性好及使用期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)成為了檢驗(yàn)界研究的焦點(diǎn),在臨床診斷、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)、藥物分析中得到了廣泛運(yùn)用。在臨床診斷中,化學(xué)發(fā)光免疫分析目前主要用于傳染病、腫瘤、甲功、激素的檢測(cè),這些檢測(cè)項(xiàng)目占測(cè)試總量的75%~80%,占市場(chǎng)金額的60%。
化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)分類
化學(xué)免疫發(fā)光技術(shù)主要有直接化學(xué)發(fā)光、酶促化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光。
(1)直接化學(xué)發(fā)光
魯米諾類標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析:魯米諾類物質(zhì)的發(fā)光為氧化反應(yīng)發(fā)光。在堿性溶液中,魯米諾可被許多氧化劑氧化發(fā)光,其中H2O2最為常用。
吖啶酯類標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析:吖啶酯在H2O2和OH-條件下,能迅速發(fā)光,吖啶酯衍生物標(biāo)記效率高且穩(wěn)定性好,發(fā)光體系簡(jiǎn)單、成本低,具有較低本底且能快速檢測(cè)。
(2)酶促化學(xué)發(fā)光
酶促化學(xué)發(fā)光屬酶免疫分析,只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑。以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng),免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物,在信號(hào)試劑作用下發(fā)光,用發(fā)光信號(hào)測(cè)定儀進(jìn)行發(fā)光測(cè)定。目前常用的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)。
酶促發(fā)光信號(hào)強(qiáng)而穩(wěn)定,發(fā)光時(shí)間較長(zhǎng),檢測(cè)方式簡(jiǎn)單、成本較低,但是工作曲線可能隨時(shí)間漂移,而且低端斜率容易呈非線性下移。
(3)電化學(xué)發(fā)光免疫分析
電化學(xué)發(fā)光免疫分析是指由電化學(xué)反應(yīng)引起的化學(xué)發(fā)光過程。ECL的反應(yīng)在電極表面進(jìn)行,發(fā)光底物為三聯(lián)吡啶釕,以三丙胺(TPA)來激發(fā)光反應(yīng),它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過程。其標(biāo)記物非常穩(wěn)定,發(fā)光時(shí)間長(zhǎng),靈敏度高,線性范圍寬,反應(yīng)時(shí)間短。
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近年來,化學(xué)發(fā)光免疫分析以其靈敏度高、線性動(dòng)力學(xué)范圍寬、光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、分析方法簡(jiǎn)便快速、結(jié)果穩(wěn)定、誤差小、安全性好及使用期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)成為了檢驗(yàn)界研究的焦點(diǎn),在臨床診斷、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)、藥物分析中得到了廣泛運(yùn)用。在臨床診斷中,化學(xué)發(fā)光免疫分析目前主要用于傳染病、腫瘤、甲功、激素的檢測(cè),這些檢測(cè)項(xiàng)目占測(cè)試總量的75%~80%,占市場(chǎng)金額的60%。
化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)分類
化學(xué)免疫發(fā)光技術(shù)主要有直接化學(xué)發(fā)光、酶促化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光。
(1)直接化學(xué)發(fā)光
魯米諾類標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析:魯米諾類物質(zhì)的發(fā)光為氧化反應(yīng)發(fā)光。在堿性溶液中,魯米諾可被許多氧化劑氧化發(fā)光,其中H2O2最為常用。
吖啶酯類標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析:吖啶酯在H2O2和OH-條件下,能迅速發(fā)光,吖啶酯衍生物標(biāo)記效率高且穩(wěn)定性好,發(fā)光體系簡(jiǎn)單、成本低,具有較低本底且能快速檢測(cè)。
(2)酶促化學(xué)發(fā)光
酶促化學(xué)發(fā)光屬酶免疫分析,只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑。以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng),免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物,在信號(hào)試劑作用下發(fā)光,用發(fā)光信號(hào)測(cè)定儀進(jìn)行發(fā)光測(cè)定。目前常用的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)。
酶促發(fā)光信號(hào)強(qiáng)而穩(wěn)定,發(fā)光時(shí)間較長(zhǎng),檢測(cè)方式簡(jiǎn)單、成本較低,但是工作曲線可能隨時(shí)間漂移,而且低端斜率容易呈非線性下移。
(3)電化學(xué)發(fā)光免疫分析
電化學(xué)發(fā)光免疫分析是指由電化學(xué)反應(yīng)引起的化學(xué)發(fā)光過程。ECL的反應(yīng)在電極表面進(jìn)行,發(fā)光底物為三聯(lián)吡啶釕,以三丙胺(TPA)來激發(fā)光反應(yīng),它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過程。其標(biāo)記物非常穩(wěn)定,發(fā)光時(shí)間長(zhǎng),靈敏度高,線性范圍寬,反應(yīng)時(shí)間短。
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