用細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的注意事項(xiàng)
為保證得到理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果在使用此試劑盒之前請(qǐng)認(rèn)真閱讀該注意事項(xiàng)。
1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質(zhì)，在保存與操作時(shí)請(qǐng)注意避光。
3.Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對(duì)眼睛有刺激作用。
4.在細(xì)胞洗滌的最后一步，請(qǐng)盡量將上清棄凈，以免PBS殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高，建議首先進(jìn)行Annexin V-FITC染色，上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
6.整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作。
7.反應(yīng)完畢后請(qǐng)盡快檢測(cè)，因?yàn)榧?xì)胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過程，反應(yīng)1小時(shí)后熒光強(qiáng)度就開始衰變。
8.成功的檢測(cè)凋亡受以下幾種因素的影響，如細(xì)胞類型、細(xì)胞膜上PS的密度、發(fā)生凋亡時(shí)PS翻轉(zhuǎn)的比例、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時(shí)間等，把這些影響因素進(jìn)行優(yōu)化對(duì)實(shí)驗(yàn)成功是非常必要的。
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